一維凝膠電泳在蛋白質化學中作用
發布時間:2022-01-17 點擊次數:40次
電泳技術是一種高技術、高要求、高裝飾性的底層防腐處理工序。它是在外加電場的作用下,使分離于電泳液中的涂料微粒定向遷移并沉積于電極之一的工件表面形成保護性的涂層。目前電泳技術已被廣泛應用于蛋白質、核酸和氨基酸等物質的分離和鑒定。
在所有蛋白質化學中應用較為廣泛的凝膠色譜分離蛋白質一維凝膠電泳是相當有用的。在一維凝膠電泳中,通常將蛋白質樣品溶解在含有巰基還原劑(巰基乙醇或DTT)和SDS的加載緩沖液中,凝膠色譜分離蛋白質的方法則是基于SDS與蛋白質的結合,即將負電荷(SDS硫酸鹽基團中)以大致恒定的分子量比例傳遞給蛋白質。當凝膠受到高壓時,蛋白質SDS復合物以一定的速率(其速率取決于其穿透凝膠孔基質的能力)通過交聯聚丙烯酰胺凝膠,從而將蛋白質按照分子量的順序分解成條帶。
現在普遍采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE),包括非變性電泳(native PAGE)和SDS-PAGE兩種,前者主要是在分離蛋白復合物時經常用到。后者是在凝膠與緩沖系統中加入陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS),蛋白質分子被大量SDS陰離子包裹,消除了它們間原來攜帶的電荷差別,因而其遷移率僅反映蛋白質分子大小,故廣泛用于蛋白質分子量的測定。
一維凝膠電泳的應用:
1、初步測定蛋白質的分子量;
2、初步分離蛋白質復合物,并進一步用于免疫組化分析;
3、對重組表達蛋白的初步鑒定;
4、將一維電泳和生物質譜相結合,達到對較簡單蛋白復合物的分離和鑒定。